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合規(guī)賦能 | VC雙三元液相輕松實現(xiàn)藥典正相二維VD測定

閱讀:201      發(fā)布時間:2024-7-23
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   維生素D簡介  
 
  維生素D(Vitamin D, VD)是維持人體健康必不可少的一類脂溶性維生素,具有促進腸道對鈣、鎂和磷酸鹽的吸收,調(diào)節(jié)機體免疫功能等多種生物功效。維生素D家族兩大重要成員是維生素D3(膽鈣化醇)和維生素D2(麥角鈣化醇),它們合稱為鈣化醇。為了預(yù)防和治療維生素D缺乏,市場上有多種維生素D或復(fù)方滴劑供消費者選擇。

 

 
  藥典0722維生素D測定第四法  
 
  2020版《中國藥典》四部通則《0722 維生素D測定方法》中采用高效液相色譜法測定維生素D及其制劑、維生素AD制劑或魚肝油中所含維生素D及前維生素D經(jīng)折算成維生素D的總量。在2015版基礎(chǔ)上,2020版藥典新增了第四法。該法采用正相二維液相色譜,供試品無需經(jīng)過復(fù)雜處理即可進樣分析,大大節(jié)省了樣品前處理的時間。第四法一維色譜柱藥典委推薦采用以脲基鍵合硅膠為填充劑(2.1mm × 150mm, 3um),該規(guī)格與賽默飛 Acclaim系列的HILIC-10色譜柱一致。其實,早在2010年左右,賽默飛液相團隊就已經(jīng)向相關(guān)食品藥品檢驗院所推薦該色譜柱,共同探討研究采用二維液相色譜技術(shù)測定維生素D的方案,并結(jié)合賽默飛獨有的雙三元液相色譜儀器開展相關(guān)實驗。

圖1.雙三元二維液相系統(tǒng)連接示意圖

 
  賽默飛特色雙三元液相  
 
  賽默飛雙三元液相早在2006年就已在市場推出,一經(jīng)推出便得到行業(yè)內(nèi)一致好評,并獲得當年匹茲堡金獎。其采用獨特的雙泵設(shè)計,每一個泵都可以獨立工作,有各自獨立的流動相比例閥和流動相進出系統(tǒng),可以同時單獨控制三種不同的流動相來進行復(fù)雜的樣品分析。柱溫箱部分放置的兩個切換閥可以通過變色龍軟件的控制在相應(yīng)的時間進行閥切換,實現(xiàn)流動相流路和色譜柱連接的不同組合切換。因此使用雙三元液相可以輕松實現(xiàn)2020版《中國藥典》維生素D測定第四法。
 
  VC雙三元液相色譜條件  
 
  Vanquish™ Core(簡稱VC)雙三元液相采用模塊化設(shè)計,耐壓達700bar,可以兼顧常規(guī)液相及部分超高效液相工作。結(jié)合配套的正相套件,即可實現(xiàn)正相體系的使用。本實驗詳細條件如表1所示。
 
表1.  雙三元二維液相色譜條件
 

 

 
  實驗結(jié)果  
 
  維生素D3校正因子f1對照品溶液和校正因子f2混合對照品溶液及供試品配置步驟參考藥典通則0722 維生素D測定法,實驗結(jié)果如下:

 

圖2.f2混合對照品溶液一維色譜圖(上)和二維色譜圖(下)

 
表2.  f2混合對照品溶液一維色譜結(jié)果
 

 

 
  由圖2及表2可見,采用雙三元液相色譜測定維生素D,前維生素D和維生素D的分離度良好,可已達到9.3,滿足藥典分離度大于5的要求;兩個峰的理論塔板數(shù)分別為9568及8798,均遠大于藥典要求的2300。

 

圖3. 某維生素D滴劑供試品一維色譜圖(上)和二維色譜圖(下)

 
  圖3顯示該維生素D滴劑供試品一維色譜中,前維生素D 受基質(zhì)干擾,與干擾峰分離度不佳,維生素D的峰形較寬。經(jīng)過二維色譜后,前維生素D與干擾峰達到分離,兩個目標峰的峰形收窄,更利于維生素D的定量。

 

圖4. f2混合對照品溶液連續(xù)進樣5針疊加圖(上圖為一維,下圖為二維)

 
  實驗對方法的重復(fù)性做了考察,結(jié)果顯示連續(xù)進樣5針,一維前維生素D及維生素D的保留時間RSD分別為0.88%及0.42%,峰面積RSD分別為1.42%及0.96%;二維前維生素D及維生素D的保留時間RSD分別為0.88%及0.42%,峰面積RSD分別為1.21%及0.80%,充分體現(xiàn)了雙三元液相兩泵的優(yōu)良性能及整個液相系統(tǒng)的穩(wěn)定性。
 
  小結(jié)  
 
  隨著2020版藥典四部通則0512高效液相色譜法中引入了多維液相色譜(單中心切割、多中心切割和全二維色譜)的介紹,市場對于二維色譜的認知及了解逐漸廣泛,也涌現(xiàn)出越來越多二維液相方法,賽默飛特色的雙三元液相完全滿足各行各業(yè)用戶二維液相色譜的需求。除二維液相色譜應(yīng)用外,賽默飛雙三元液相色譜儀同樣被廣泛應(yīng)用于液質(zhì)聯(lián)用在線除鹽,Online-SPE(在線固相萃取),串聯(lián)及并聯(lián)液相以及特色電霧式檢測器CAD反梯度補償等高級應(yīng)用,為廣大企業(yè)用戶降本增效。

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